血清沉淀是否會(huì)影響細(xì)胞生長？如何避免？

發(fā)布時(shí)間： 2021-08-18　　點(diǎn)擊次數(shù)： 1364次

血清是細(xì)胞培養(yǎng)試劑中最基礎(chǔ)普遍的試劑之一，之前我們已經(jīng)介紹過了有關(guān)特殊加工工藝血清的一些小知識(shí)（了解和認(rèn)識(shí)胎牛血清，特殊加工工藝血清，您知道幾種？），那么今天我們將繼續(xù)了解有關(guān)血清沉淀與血清熱滅活的相關(guān)知識(shí)~

血清沉淀是否會(huì)影響細(xì)胞生長？如何避免？

血清沉淀

1. 血清沉淀是什么？

血清中經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)肉眼可見的沉淀，其成分有多種類型，產(chǎn)生的原因有很多。主要有纖維蛋白（絮狀沉淀）、甲胎蛋白、脂蛋白、冷凝集素、玻粘連蛋白、磷酸鈣（顯微鏡下小黑點(diǎn)沉淀）、膽固醇等。

●纖維蛋白（Fibrin）

血清中肉眼可見的沉淀物大多屬于這一類型。由于在生產(chǎn)過程中，血清采集、過濾（3 次 0.1μm過濾）和灌裝處理都是在低溫條件下快速完成, 此時(shí)血清中纖維蛋白原（Fibrinogen）處于溶解狀態(tài)。但在解凍之后, 血清中纖維蛋白原往往會(huì)發(fā)生凝集，形成肉眼可見的沉淀。

血清沉淀是否會(huì)影響細(xì)胞生長？如何避免？

▲ 纖維蛋白沉淀圖

●磷酸鈣（Calcium Phosphate）

這是一種常見的沉淀成分，通常會(huì)造成血清出現(xiàn)云霧狀渾濁。當(dāng)血清在 37℃保存時(shí)，這種現(xiàn)象尤其明顯，在倒置顯微鏡下可觀察到小黑點(diǎn)的存在。這些小黑點(diǎn)在布朗運(yùn)動(dòng)的作用下四處游動(dòng)，常被誤認(rèn)為是微生物污染。

●其他成分（Other）

血清中的其他成分也會(huì)形成沉淀，例如膽固醇形成的油脂滴和其他蛋白沉淀等。

2. 沉淀是如何形成的？

造成沉淀的主要原因是溫度的改變、熱滅活、反復(fù)凍融、長期儲(chǔ)存于2-8℃或者室溫。

3. 血清沉淀會(huì)影響細(xì)胞培養(yǎng)嗎？

我們?cè)诔鰪S前都會(huì)對(duì)血清進(jìn)行一系列質(zhì)檢測試，確保血清質(zhì)量達(dá)到嚴(yán)格標(biāo)準(zhǔn)。血清測試和細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)也表明，其沉淀成分不會(huì)影響血清作為細(xì)胞培養(yǎng)添加物的表現(xiàn)。這一點(diǎn)得到了眾多用戶和其他血清供應(yīng)商的肯定。解凍之后, 血清中纖維蛋白原往往會(huì)發(fā)生凝集，形成肉眼可見的沉淀。

磷酸鈣顆粒經(jīng)常會(huì)被當(dāng)成微生物污染而引發(fā)不必要的擔(dān)憂。一般情況下，當(dāng)操作人員融化血清后注意到有霧狀渾濁時(shí)，常將其存放在 4℃冰箱中觀察，并考慮接下來是否繼續(xù)使用。但這樣會(huì)使沉淀進(jìn)一步增多，反而會(huì)使血清更加渾濁，進(jìn)而誤以為存在血清污染。并且，在倒置顯微鏡下，可在血清中觀察到小黑點(diǎn)（磷酸鈣顆粒的布朗運(yùn)動(dòng)），更容易使人誤以為存在微生物污染。

為防止這類誤解的產(chǎn)生，我們不建議用戶培養(yǎng)血清來驗(yàn)證是否存在污染，而是將血清直接接種在細(xì)菌培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，以觀察是否有細(xì)菌的增殖。并且，進(jìn)行革蘭氏染色，并在油鏡（100 X 10 倍）下觀察可直接確認(rèn)是否存在微生物污染。

Zeta Life血清經(jīng)過3次0.1μm過濾除菌，低內(nèi)毒素，通過血紅蛋白測試合格，經(jīng)美國農(nóng)業(yè)部（USDA)認(rèn)證。

4. 如何避免血清沉淀

●正確解凍

首先，應(yīng)按照逐步解凍的方式正確解凍血清：從-20℃取出后，置于4℃冰箱緩慢解凍，最后置于室溫完成解凍。如果直接從-20℃拿到室溫或37℃水浴解凍，則非常容易產(chǎn)生沉淀。在解凍過程中，請(qǐng)注意，應(yīng)時(shí)不時(shí)緩慢搖晃血清瓶，可減少沉淀的產(chǎn)生。為避免反復(fù)凍融，建議您將血清分裝使用。

●使用和保存注意事項(xiàng)

血清沉淀很難預(yù)測和避免，出現(xiàn)沉淀后也無需擔(dān)憂，這并不會(huì)影響血清的品質(zhì)。已知血清沉淀在以下條件下會(huì)有增多的可能：

1) 熱滅活；

2) 37℃培養(yǎng)；

3) 反復(fù)凍融；

4) 伽馬射線照射；

5) 2-8℃長期保存；

6) 長期保存于可自動(dòng)化霜的冰箱中（溫度不穩(wěn)定）；

●血清沉淀的形成機(jī)理多種多樣，具體的機(jī)理尚不十分明確。我們尚不能準(zhǔn)確預(yù)測和控制血清沉淀的產(chǎn)生。目前市面上所有品牌的血清產(chǎn)品都存在沉淀現(xiàn)象，這一點(diǎn)可以在各品牌網(wǎng)站上關(guān)于沉淀問題的聲明上得到證實(shí)。

5. 有沉淀時(shí)如何處理？

我們建議您采用2000rpm離心5分鐘，取上清使用就好，比過濾方便，不需要另外準(zhǔn)備濾芯和針筒，且不容易污染。

總結(jié)建議

血清產(chǎn)品中出現(xiàn)沉淀屬于正?，F(xiàn)象，不會(huì)影響到血清的品質(zhì)，對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)也不會(huì)產(chǎn)生影響，大家可以放心使用，若不立即使用，血清應(yīng)保存在-20℃以下。

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