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Thp-1細胞高效率轉(zhuǎn)染條件分享
發(fā)布時間: 2021-08-23 點擊次數(shù): 1272次一、轉(zhuǎn)染材料準備
1. 轉(zhuǎn)染試劑用量:10ul
2. siRNA濃度:20um/L
3. 細胞密度:1*106-1*105
4. 轉(zhuǎn)染用培養(yǎng)板:6孔板
5. 轉(zhuǎn)染試劑:Advanced DNA RNA轉(zhuǎn)染試劑;
貨號:AD600025
6. 轉(zhuǎn)染時間:48小時
7. 細胞培養(yǎng)胎牛血清:Z7180FBS-500超低內(nèi)毒素胎牛血清
8. 細胞凍存液:L0100無血清細胞凍存液.
注意:本細胞轉(zhuǎn)染用量條件不適合lipo使用。
操作過程:
1.提前1天接種細胞:細胞匯合度在60-80%左右,再進行轉(zhuǎn)染。
2. 核酸復(fù)合物制備:將核酸與轉(zhuǎn)染試劑按照比例關(guān)系直接混合,用移液器吹打、混勻,室溫靜止15分鐘。
3.在細胞培養(yǎng)基中加入核酸復(fù)合物:根據(jù)參考用量在細胞中加入核酸復(fù)合物,并輕輕混勻;細胞培養(yǎng)基里面可以含有血清。
4.細胞換液:轉(zhuǎn)染24小時后對細胞進行正常換液,懸浮細胞轉(zhuǎn)染過程中不用換液。
5.分析結(jié)果:質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染48-72小時后熒光檢測轉(zhuǎn)染效率,48-96小時檢測mRNA或蛋白表達。若進行穩(wěn)定表達細胞株的篩選,則在轉(zhuǎn)染后24-48小時左右加入適量的藥物進行篩選。siRNA轉(zhuǎn)染后9小時熒光檢測轉(zhuǎn)染效率,48-72小時檢測mRNA或蛋白表達。
二、轉(zhuǎn)染試劑產(chǎn)品介紹
Zeta Life 公司與美國加利福尼亞大學(xué)舊金山校區(qū)聯(lián)合開發(fā)用于哺乳動物細胞、活體動物轉(zhuǎn)染的 Advanced DNA RNA 第三代多肽小分子轉(zhuǎn)染試劑,此技術(shù)成為新的全球蛋白功能、免疫細胞及干細胞治療、研發(fā)及生產(chǎn)的主要關(guān)鍵技術(shù)之一。
三、優(yōu)秀表現(xiàn)
Zeta Life多肽小分子轉(zhuǎn)染試劑尺寸大小是傳統(tǒng)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑體積的1/10;
本轉(zhuǎn)染試劑是通過細胞內(nèi)?和細胞主動吸收進入細胞;
本轉(zhuǎn)染試劑進入后對細胞膜無物理性損傷,不易出現(xiàn)細胞變形,保持高的細胞活力;
不激活細胞表面或細胞體內(nèi)marker;
可反映真實的細胞通路蛋白原始數(shù)據(jù);
可轉(zhuǎn)染免疫細胞、懸浮細胞等。
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