Thp-1細(xì)胞高效率轉(zhuǎn)染條件分享

一、轉(zhuǎn)染材料準(zhǔn)備

1. 轉(zhuǎn)染試劑用量：10ul

2. siRNA濃度：20um/L

3. 細(xì)胞密度：1*106-1*105

4. 轉(zhuǎn)染用培養(yǎng)板：6孔板

5. 轉(zhuǎn)染試劑：Advanced DNA RNA轉(zhuǎn)染試劑；

                     貨號(hào)：AD600025

6. 轉(zhuǎn)染時(shí)間：48小時(shí)

7. 細(xì)胞培養(yǎng)胎牛血清：Z7180FBS-500超低內(nèi)毒素胎牛血清

8. 細(xì)胞凍存液：L0100無(wú)血清細(xì)胞凍存液.

注意：本細(xì)胞轉(zhuǎn)染用量條件不適合lipo使用。

操作過(guò)程：

1.提前1天接種細(xì)胞：細(xì)胞匯合度在60-80%左右，再進(jìn)行轉(zhuǎn)染。

2. 核酸復(fù)合物制備：將核酸與轉(zhuǎn)染試劑按照比例關(guān)系直接混合，用移液器吹打、混勻，室溫靜止15分鐘。

3.在細(xì)胞培養(yǎng)基中加入核酸復(fù)合物：根據(jù)參考用量在細(xì)胞中加入核酸復(fù)合物，并輕輕混勻；細(xì)胞培養(yǎng)基里面可以含有血清。

4.細(xì)胞換液：轉(zhuǎn)染24小時(shí)后對(duì)細(xì)胞進(jìn)行正常換液，懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染過(guò)程中不用換液。

5.分析結(jié)果：質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染48-72小時(shí)后熒光檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率，48-96小時(shí)檢測(cè)mRNA或蛋白表達(dá)。若進(jìn)行穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株的篩選，則在轉(zhuǎn)染后24-48小時(shí)左右加入適量的藥物進(jìn)行篩選。siRNA轉(zhuǎn)染后9小時(shí)熒光檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率，48-72小時(shí)檢測(cè)mRNA或蛋白表達(dá)。

二、轉(zhuǎn)染試劑產(chǎn)品介紹

Zeta Life 公司與美國(guó)加利福尼亞大學(xué)舊金山校區(qū)聯(lián)合開(kāi)發(fā)用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞、活體動(dòng)物轉(zhuǎn)染的 Advanced DNA RNA 第三代多肽小分子轉(zhuǎn)染試劑，此技術(shù)成為新的全球蛋白功能、免疫細(xì)胞及干細(xì)胞治療、研發(fā)及生產(chǎn)的主要關(guān)鍵技術(shù)之一。

三、優(yōu)秀表現(xiàn)

Zeta Life多肽小分子轉(zhuǎn)染試劑尺寸大小是傳統(tǒng)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑體積的1/10;

本轉(zhuǎn)染試劑是通過(guò)細(xì)胞內(nèi)?和細(xì)胞主動(dòng)吸收進(jìn)入細(xì)胞；

本轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)入后對(duì)細(xì)胞膜無(wú)物理性損傷，不易出現(xiàn)細(xì)胞變形，保持高的細(xì)胞活力；

不激活細(xì)胞表面或細(xì)胞體內(nèi)marker;

可反映真實(shí)的細(xì)胞通路蛋白原始數(shù)據(jù)；

可轉(zhuǎn)染免疫細(xì)胞、懸浮細(xì)胞等。