qPCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析基本步驟（二）

閾值，我們?cè)诓僮鬈浖r(shí)上下拉動(dòng)的橫線，是決定Ct值的因素之一。

閾值是熒光信號(hào)相對(duì)于基線有顯著增強(qiáng)的點(diǎn)，大多數(shù)儀器會(huì)根據(jù)基線平均信號(hào)，自動(dòng)計(jì)算熒光信號(hào)的閾值水平，并設(shè)置一個(gè)比平均值高10倍的閾值。

也就是說，當(dāng)基線被正確的設(shè)置了，閾值也能手動(dòng)調(diào)整成正確值。

需要注意的是：

1、讀取閾值相關(guān)的分析數(shù)據(jù)時(shí)，不能隨意改變閾值的設(shè)置。只有分析不同樣本，或相同樣本不同靶基因時(shí)，才能調(diào)整閾值。

2、設(shè)置閾值線時(shí)，要在擴(kuò)增曲線的指數(shù)擴(kuò)增區(qū)域內(nèi)設(shè)置，不能在起始階段，也不能在熒光背景（基線）區(qū)域。

3、每次改變閾值時(shí)，要查看標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率和R的平方有沒有改善。沒有使用標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)，也可以計(jì)算3個(gè)復(fù)孔（相同條件擴(kuò)增的樣本）的標(biāo)準(zhǔn)偏差。好的閾值應(yīng)該要改善Ct值的表現(xiàn)。