帶你走近細(xì)胞生物學(xué)世界的第一步——細(xì)胞培養(yǎng)

細(xì)胞培養(yǎng)的概念：

    細(xì)胞培養(yǎng)（cell culture）是指在體外模擬體內(nèi)環(huán)境（無(wú)菌、適宜溫度、酸堿度和一定營(yíng)養(yǎng)條件等），使之生存、生長(zhǎng)、繁殖并維持主要結(jié)構(gòu)和功能的一種方法。細(xì)胞培養(yǎng)也叫細(xì)胞克隆技術(shù)，在生物學(xué)中的正規(guī)名詞為細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)可以由一個(gè)細(xì)胞經(jīng)過(guò)大量培養(yǎng)成為簡(jiǎn)單的單細(xì)胞或極少分化的多細(xì)胞，通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)既可以獲得大量細(xì)胞，又可以借此研究細(xì)胞的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞的合成代謝、細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖等。

細(xì)胞培養(yǎng)所需的儀器設(shè)備：

細(xì)胞培養(yǎng)所需的試劑：

細(xì)胞培養(yǎng)的類別：

原代細(xì)胞(primary cell)是指從機(jī)體的組織中經(jīng)蛋白酶或其它的方法獲得、并在體外進(jìn)行培養(yǎng)的細(xì)胞，稱為原代細(xì)胞。一般認(rèn)為，培養(yǎng)的原代的第1代細(xì)胞和傳代到第10代以內(nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。

細(xì)胞系(cell strain)：原代培養(yǎng)物經(jīng)胰酶等物質(zhì)第一次消化傳代后即為細(xì)胞系，由原先存在于原代培養(yǎng)物中的細(xì)胞系所組成。如果不能繼續(xù)傳代，或傳代次數(shù)有限，可稱為有限細(xì)胞系，如可以連續(xù)培養(yǎng)，則稱為連續(xù)細(xì)胞系，培養(yǎng)50代以上并無(wú)限培養(yǎng)下去。

細(xì)胞株(cell line)：從細(xì)胞系中用單細(xì)胞分離培養(yǎng)或篩選的方法，由單細(xì)胞增殖形成的細(xì)胞群，稱細(xì)胞株。細(xì)胞株的特殊性質(zhì)或標(biāo)志必須在整個(gè)培養(yǎng)期間始終存在。如果不能繼續(xù)傳代或傳代有限，稱為有限細(xì)胞株；如果可以連續(xù)傳代，稱為連續(xù)細(xì)胞株。

細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程：

細(xì)胞復(fù)蘇：

將凍存的細(xì)胞從液氮中取出后，在37℃水浴鍋內(nèi)不斷搖動(dòng)直到*融化后放入離心機(jī)中，800rpm-1000rpm，5min，然后在超凈臺(tái)中將上清液棄掉，加入1ml預(yù)熱的培養(yǎng)基，輕輕吹勻后轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)足細(xì)胞生長(zhǎng)所需的培養(yǎng)基，呈“十"混勻后放入含5%CO₂的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

細(xì)胞傳代：

待細(xì)胞密度達(dá)到80%~90%時(shí)，棄去原培養(yǎng)基，用5ml PBS清洗3次。加入一定量含0.25% EDTA的胰蛋白酶，放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中（不同的細(xì)胞消化時(shí)間不同）。待細(xì)胞消化*后加入胰蛋白酶的3倍體積的含血清培養(yǎng)基進(jìn)行中和，輕輕吹吸混勻，根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)特性進(jìn)行1：2或1：3傳代培養(yǎng)。

細(xì)胞凍存：

待細(xì)胞密度達(dá)到80%~90%時(shí)，棄去原培養(yǎng)基，用5ml PBS清洗3次。加入一定量含0.25% EDTA的胰蛋白酶，放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中（不同的細(xì)胞消化時(shí)間不同）。待細(xì)胞消化*后加入胰蛋白酶的3倍體積的含血清培養(yǎng)基進(jìn)行中和，輕輕吹吸混勻，轉(zhuǎn)移到離心管中800rpm-1000rpm，5min進(jìn)行離心，然后在超凈臺(tái)中將上清液棄掉，加入1ml凍存液，放入凍存盒內(nèi)（盒內(nèi)有異丙醇，以保證梯度降溫），立即放入一80℃冰箱內(nèi)，第二天轉(zhuǎn)入液氮中，可以保存至少兩年。

凍存液的配制：70%的*培養(yǎng)基+20%FBS+10%DMSO。

細(xì)胞培養(yǎng)中常見(jiàn)的污染及處理辦法：

真菌：一般培養(yǎng)基不會(huì)變渾濁，保持清亮，顯微鏡下可觀察到絲狀物，有的真菌剛開(kāi)始會(huì)像細(xì)胞碎片，慢慢會(huì)長(zhǎng)出黑色絲狀物，對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)有明顯的影響。