細胞培養(yǎng)常見問題及解答（一）

1. 如何選用特殊細胞系培養(yǎng)基？

 培養(yǎng)某一類型細胞沒有固定的培養(yǎng)條件。在MEM中培養(yǎng)的細胞，很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長。總之，首先選MEM做粘附細胞培養(yǎng)、RPMI-1640做懸浮細胞培養(yǎng)是一個好的開始。

2. 何時須更換培養(yǎng)基？

視細胞生長密度而定，或遵照細胞株基本數據上的更換時間，按時更換培養(yǎng)基即可。

3. 可否使用與原先培養(yǎng)條件不同的培養(yǎng)基？  

不能。每一細胞株均有其特定使用且已適應的細胞培養(yǎng)基，若驟然使用和原先提供的培養(yǎng)條件不同的培養(yǎng)基，細胞大都無法立即適應，造成細胞無法存活。

4. 可否使用與原先培養(yǎng)條件不同的血清種類？

不能。血清是細胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源，所以血清的種類和品質對于細胞的生長會產生極大的影響。來自不同物種的血清，，在一些物質或分子的量或內容物上都有所不同，血清使用錯誤常會造成細胞無法存活。

5. 何謂FBS, FCS, CS, HS ?

FBS (fetal bovine serum) 和FCS (fetal calf serum) 是相同的意思，兩者都是指胎牛血清，乃錯誤的使用字眼，請不要再使用。CS (calf serum) 則是指小牛血清。HS (horseserum) 則是指馬血清。

6. 培養(yǎng)細胞時應使用5% 或10% CO2？或根本沒有影響？

一般培養(yǎng)基中大都使用HCO3-/CO3 2-/H+ 作為pH 的緩沖系統(tǒng)，而培養(yǎng)基中NaHCO3 的含量將決定細胞培養(yǎng)時應使用的CO2 濃度。當培養(yǎng)基中NaHCO3 含量為每公升3.7 g 時，細胞培養(yǎng)時應使用10% CO2；當培養(yǎng)基中NaHCO3 為每公升1.5 g 時，則應使用5% CO2 培養(yǎng)細胞。

7.Hank's 平衡鹽溶液(HBS)要在空氣中使用，不需要CO2培養(yǎng)箱。原因是什么？Hank's 平衡鹽溶液(HBS)和Earle's平衡鹽溶液(EBS)有什么本質的功能差別？

HBS和EBS 的主要差別在于碳酸氫鈉的水平，在Eagles (2.2 g/L)中比在Hanks (0.35 g/L) 中高。碳酸氫鈉需用高水平的CO2平衡，以維持溶液的PH值。Eagles液在空氣水平的CO2 中，溶液會變堿，Hanks液在CO2培養(yǎng)箱中會變酸。如果希望在CO2培養(yǎng)箱中保存組織，需要用Eagles液，如果僅僅是清洗將要在細胞培養(yǎng)基中儲存的組織，用Hanks液就可以了。

8. 什么是細胞的接種密度？

依照細胞株基本數據上的接種密度或稀釋分盤的比例接種即可。細胞數太少或稀釋的太多亦是造成細胞無法生長之一重要原因。

9. 懸浮性細胞應如何繼代處理？

一般僅需持續(xù)加入新鮮培養(yǎng)基于原培養(yǎng)角瓶中，稀釋細胞濃度即可，若培養(yǎng)液太多時，可將培養(yǎng)角瓶口端稍微抬高，直到無法容納為止。分瓶時取出一部份含細胞的培養(yǎng)液至另一新的培養(yǎng)角瓶，加入新鮮培養(yǎng)基稀釋至適當濃度，重復前述步驟即可。

10. 冷凍管應如何解凍？ 

取出冷凍管后，須立即放入37℃水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1 分鐘內全部融化，并注意水面不可超過冷凍管蓋沿，否則易發(fā)生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時，必須注意安全，預防冷凍管之爆裂。

11. 細胞冷凍管解凍培養(yǎng)時， 是否應馬上去除DMSO？

除少數特別注明對DMSO 敏感的細胞外，絕大部分細胞株(包括懸浮性細胞)，在解凍之后，應直接放入含有10-15 ml新鮮培養(yǎng)基的培養(yǎng)角瓶中，待隔天再置換新鮮培養(yǎng)基以去除DMSO 即可，如此可避免大部分解凍后細胞無法生長或貼附的問題。

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