從有限的細胞中提取 RNA

一、材料

1. 緩沖液、試劑和溶液

75% 乙醇 (超純水配制）

糖原，5 mg/ml(Ambion，Austin，TX)

StratageneRNA 提取試劑盒（200345，StratageneCloningSystems，LaJolla,CA)，

包括變性溶液、飽和酚 (存于 4°C)、β-巰基乙醇 (存于 4°C)、氯仿：異戊醇、

2mol/L 乙酸鈉、異丙醇?；蛘呤褂?PicoPureRNA 分離試劑盒（KIT0202，Arcturus，

MountainView,CA)

DEPC 處理的超純水 (BiotecxLaboratories，Houston，TX)(4°C 儲存）

2. 特殊設(shè)備

移液器

無 RNA 酶的 1.5 ml 管子

3. 細胞和組織

來自方案 3 的 LCM 帽子

二、方法

1. 加入 200ul 變性溶液和 1.6ulβ-巰基乙醇到 0.5 ml 管子中。

2. 將 LCM 帽子插入管子，渦旋 5s。

3. 倒置管子孵育 5 min。

4. 移去 LCM 帽子。這一步獲得的樣品可以在-80°C 保存 6 個月。

5. 將溶液轉(zhuǎn)移到 1.5 ml 管子中。

6. 加入 2ul2mol/L 的乙酸鈉，溫和混勻。

7. 加入 220ul 水飽和的酚（底層），溫和混勻。

8. 加入 60ul 氯仿：異戊醇，劇烈晃動。

9. 放于冰上 15 min。

10.14000r/min4°C 離心 30 min。

11. 吸上層溶液到新管子中。

12. 加入 2ul 糖原（最終濃度 10~150ug/ml)。

13. 加入 200ul 冷異丙醇。

14.-80°C 過夜。

深圳安培生物科技有限公司，是一家具有核心的技術(shù)實力、壹流的經(jīng)營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業(yè)?？偛吭O(shè)在廣東，服務(wù)面向全國。安培生物集進口試劑、實驗室耗材銷售、技術(shù)服務(wù)與合約開發(fā)為一體的專業(yè)化高科技公司，旨在為生命科學的發(fā)展提供壹流的產(chǎn)品與服務(wù)。本公司建立了涵蓋分子生物學、細胞生物學、免疫學、信號傳導和神經(jīng)科學等領(lǐng)域的產(chǎn)品供應線，在各個領(lǐng)域內(nèi)向用戶提供世界前沿水平和質(zhì)量穩(wěn)定的產(chǎn)品，安培生物致力于為廣大的科研機構(gòu)、高等院校等優(yōu)質(zhì)客戶提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品、技術(shù)支持與服務(wù)。