siRNA轉(zhuǎn)染操作及要點

轉(zhuǎn)染試劑儲存

轉(zhuǎn)染試劑-20°C避光保存，Trans Enhancer于2-8°C存放

體外轉(zhuǎn)染操作流程

1：細(xì)胞接種:轉(zhuǎn)染前一天接種細(xì)胞，使細(xì)胞在轉(zhuǎn)染時密度在30-50%

2：siRNA-Starvio 轉(zhuǎn)染復(fù)合物準(zhǔn)備:Starvio 用25ulTrans Enhancer 稀釋室溫孵育5min將siRNA稀釋液與 Starvio 稀釋液混合(總體積50ul)

將轉(zhuǎn)染復(fù)合物加到培養(yǎng)的細(xì)胞內(nèi) 

注意事項

1:建議對轉(zhuǎn)染條件進(jìn)行優(yōu)化，特別是第一次使用。例如:24孔培養(yǎng)板，siRNA 用量在 6、12、18、24、30 pmol之間調(diào)整；

2：Starvio 試劑用量在1.0-3.0ul之間調(diào)整；

3：轉(zhuǎn)染過程盡量不要使用抗生素，否則會導(dǎo)致細(xì)胞死亡；

4：增加計算接種細(xì)胞的數(shù)量，使轉(zhuǎn)染時細(xì)胞密度在30-50%左右。

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