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    細胞結(jié)構(gòu)中的神奇細胞器：脂滴

    發(fā)布時間： 2024-01-30　　點擊次數(shù)： 1094次

    今天我們要來聊一下細胞結(jié)構(gòu)里面的一個神秘小東西-脂滴


    沒錯沒錯，你沒看錯！這就是那些小小的圓圓的、像是浸泡在脂肪里的小球球！它們的外觀看起來就像是脂肪掉進了細胞里，而且它們還有著各種神奇的功能。


    那么，脂滴到底是什么呢？它們是由一種叫做“脂質(zhì)"的化學(xué)物質(zhì)組成的。脂滴是脂質(zhì)和能力穩(wěn)態(tài)中心的儲存細胞器。它們具有不一樣的結(jié)構(gòu)，由中性脂質(zhì)的疏水核心組成，該核心由磷脂單層包圍，磷脂單層由一組特定的蛋白質(zhì)修飾。脂質(zhì)本質(zhì)上就是脂肪酸和甘油的混合物，它們在細胞里的主要功能就是作為能量儲備。


    脂滴不僅僅是細胞內(nèi)的能量儲備庫，它們還可以幫助細胞進行重要的功能。如蛋白質(zhì)降解、隔離轉(zhuǎn)錄因子和染色質(zhì)成分以及為某些核受體生成脂質(zhì)配體。此外，病毒核衣殼蛋白核心本身可與脂滴表面結(jié)合并協(xié)調(diào)病毒感染的持續(xù)傳播。它們可以幫助調(diào)節(jié)細胞內(nèi)的代謝過程，幫助細胞在不同的生理狀態(tài)下更好地運作。此外，脂滴還可以作為一種儲存信號分子的地方，這些信號分子可以在需要的時候釋放出來，幫助細胞完成一些復(fù)雜的生化反應(yīng)。


    脂滴看起來很小，但它們在細胞內(nèi)的重要性不可小覷。當(dāng)人體內(nèi)能量供應(yīng)充足的時候，脂滴會不斷地增加，以儲備能量；而當(dāng)人體需要能量的時候，脂滴又會迅速地釋放出來，為身體提供能量支持。


    那么，脂滴在我們的身體里面到底長什么樣呢？其實，它們的外觀有點像一個個小圓球，通常都位于細胞的中央?yún)^(qū)域，但也會分布在整個細胞內(nèi)。如果你有看過一些細胞結(jié)構(gòu)的圖像的話，你會發(fā)現(xiàn)，脂滴通常會在圖像上顯示成一個個小點點，而且數(shù)量通常也很多。小小脂滴如何檢測呢？


    1.     C11 BODIPY 581/591

    C11 BODIPY 581/591 (Catalog No.: GC40165) 是一種 BODIPY 氟硼熒衍生物，具有良好的光穩(wěn)定性、低熒光偽影特質(zhì)。C11 BODIPY 581/591 常用于活細胞內(nèi)脂質(zhì)過氧化比率和抗氧化性能的研究，或與羥基自由基反應(yīng)、檢測鐵死亡 (ferroptosis)。C11 BODIPY 581/591 發(fā)射波長為 591 nm (還原型)，或紅移至 510 nm (氧化型)；激發(fā)波長分別為 581 nm (還原型)、500 nm (氧化型)。

    1. 細胞制備：

    懸浮細胞：離心收集細胞，加入 PBS 洗滌兩次，每次 5 分鐘。

    貼壁細胞：棄去培養(yǎng)基，加入胰蛋白酶消化細胞。離心棄去上清后，加入 PBS 洗滌兩次，每次 5 分鐘。

    2. 加入 1 mL C11 BODIPY 581/591 工作液，室溫孵育 15 分鐘。

    3.  400 g，4℃ 離心 3-4 分鐘，棄去上清。

    4. 加入 PBS 洗滌細胞兩次，每次 5 分鐘。

    5. 用熒光顯微鏡拍照，設(shè)置氧化型的激發(fā)光和發(fā)射光分別為460–495nm 和 510–550nm。還原型激發(fā)光和發(fā)射光分別為565–581nm和 585–591nm。



    2. BODIPY 493/503

    BODIPY 493/503 (Catalog No.: GC42959) 是一種親脂性熒光染料，發(fā)出亮綠色熒光，已廣泛用于脂質(zhì)滴標(biāo)記（Ex/Em:493/503 nm）。BODIPY 493/503與熒光、共焦和雙光子顯微鏡以及流式細胞儀兼容，可用于活細胞和固定細胞。

    1. 在與研究相關(guān)的培養(yǎng)條件下培養(yǎng)細胞。 （例如，35 mm 孔中有 50,000 個 A498 細胞。）

    注意：細胞與 30 μM 油酸一起孵育過夜可作為增加中性脂質(zhì)含量的陽性對照，因為油酸是甘油三酯合成和儲存的有效誘導(dǎo)劑。 不含脂肪酸的 BSA 作為對照。

    2. 在感興趣的時間點，在 PBS 中制備 2 μM BODIPY 493/503 染色溶液。

    3. 使用 3 ml PBS 快速漂洗細胞以去除培養(yǎng)基/血清。

    4. 在 BODIPY 493/503 染色液中于 37 °C 避光孵育 15 分鐘。 包括用于流式細胞術(shù)的未染色控制。

    5. 使用 3 ml PBS 快速漂洗細胞以去除染色液。

    6. 用胰蛋白酶消化細胞以產(chǎn)生單細胞懸液。 對于本協(xié)議中使用的 A498 細胞系，細胞在 37°C 下與胰蛋白酶-EDTA（0.25%）孵育 5 分鐘。

    7. 加入 5 ml PBS 并將細胞懸液轉(zhuǎn)移到 15 ml 錐形管中。

    8. 以 250×g、5 分鐘、4 °C 沉淀細胞。

    9. 吸出上清液，用 3 ml PBS 快速漂洗細胞沉淀，并以 250 × g，5 分鐘，4 °C 沉淀細胞。

    10. 小心吸出上清液并在 300 μl 1x 流式細胞術(shù)緩沖液中重懸細胞。

    11. 將細胞懸液通過 35 μm 過濾器放入 FACS 管中。

    12. 進行流式細胞術(shù)。 每個條件至少獲得 10,000 個事件。

    13. 將數(shù)據(jù)分析為平均熒光或?qū)?shù)據(jù)顯示為直方圖。


    3. Oil Red O

    油紅 O （Catalog No.:GC25676）是一種溶血色素（脂溶性染料）重氮染料，用于冷凍切片上的中性甘油三酯和脂質(zhì)以及石蠟切片上的一些脂蛋白的染色。 它具有紅色粉末的外觀，最大吸光度為 518 納米。

    1. 制備儲存液

    0.1 g 油紅 O 溶于 20 mL 丙二醇。

    2.細胞染色

    2.1 將冷凍切片的組織載玻片風(fēng)干并用 4% 多聚甲醛固定。

    2.2在室溫下用油紅 O 溶液染色 30 分鐘。

    2.3 用蒸餾水沖洗 10 分鐘。

    2.4 載玻片用明礬蘇木精輕輕染色 1 分鐘。

    2.5用蒸餾水沖洗，并安裝用于顯微鏡檢查。


    4. 其他脂滴熒光探針

    Cat.No.

    Product Name

    Information


    GC42964

    BODIPY-Cholesterol

    BODIPY-cholesterol is a biologically  active and cel-permeable analog of cholesterol that is tagged with a  fluorescent BODIPY group at carbon 24.



    GC42249

    3-BODIPY-propanoylaminocaproic Acid N-hydroxysuccinimide ester

    3-BODIPY-propanoylaminocaproic acid  N-hydroxysuccinimide ester (BODIPY FL-X SE) is an amine-reactivefluorescent  probe.

    GC44574

    PBD-BODIPY

    PBD-BODIPY is a probe for the  spectrophotometric measurement of autoxidation reactions.


    GC42960

    BODIPY 505/515

    BODIPY 505/515, a lipophilic  fluorescence dye, emits fluorescence has been used extensively for lipid  droplet labeling (Ex/Em: 505/515 nm).


    GC42963

    BODIPY-C12 Ceramide (d18:1/12:0)

    BODIPY-C12 Ceramide (B12Cer) is a  fluorescently-tagged form of C12 ceramide that displays excitation/emission  maxima of 505/540 nm, respectively.


    GC42962

    BODIPY 630/650X succinimide ester

    BODIPY 630/650X succinimide ester is a  fluorescent conjugate of the adenosine receptor ligand  N-ethylcarboxamido-adenosine (NECA).

    GC42959

    BODIPY 493/503

    BODIPY 493/503, a lipophilic  fluorescence dye, emits bright green fluorescence has been used extensively  for lipid droplet labeling (Ex/Em: 493/503 nm).

    GC40165

    C11 BODIPY 581/591

    C11-BODIPY581/591 is a fluorescent  ratio-probe of lipid oxidation.

    GC42961

    BODIPY 558/568 C12

    BODIPY 558/568 C12 is a fatty  acid-conjugated fluorescent probe for lipid droplets.

    所以，小伙伴們，現(xiàn)在你們已經(jīng)知道了脂滴是什么了，它們是細胞內(nèi)的重要組成部分，不僅僅是能量儲備庫，還能幫助細胞完成很多生物學(xué)功能。是不是覺得很神奇呢？趕快去看看你身邊的細胞，是不是也有一些小小的圓圓的小球球在里面跳。

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