線粒體功能檢測方法

線粒體是決定細胞命運的重要樞紐，在細胞生理變化、信號傳導通路和新陳代謝等方面具有重要調節(jié)功能，對細胞的增殖、分化、存活以及穩(wěn)態(tài)的維持起著重要的調節(jié)作用。線粒體參與腫瘤、心血管疾病、神經退行性疾病、糖尿病、免疫性疾病等眾多疾病的發(fā)生發(fā)展。線粒體與各項疾病研究的關聯(lián)性在于，線粒體是產生能量的重要細胞器，當其機能下降時，細胞的活性也會下降。

線粒體參與生物的生長、發(fā)育、代謝、衰老、疾病、死亡過程并進行調控或信號傳導，它還參與細胞內Ca2+的穩(wěn)態(tài)調控、活性氧的產生以及細胞色素C的釋放等這些代謝過程，線粒體功能的檢測往往能反映生物體狀態(tài)變化，通常有以下檢測指標。

線粒體ATP測定

線粒體是細胞物質代謝轉化生成ATP的主要場所。ATP一般認為是生物體最重要的能量代謝物質，可以給生命活動提供動力，參與各種生命活動過程。細胞內ATP含量容易被細胞所處的環(huán)境影響，如毒性應激、缺氧等[1]。檢測ATP的方法一般有化學發(fā)光法、酶偶聯(lián)法、高效液相色譜法等。

線粒體呼吸鏈復合體與三羧酸循環(huán)過程測定

線粒體呼吸鏈位于線粒體內膜上，由5個復合物組成(復合物I-V)，從Krebs循環(huán)(三羧酸循環(huán))反應產生的高能化合物通過呼吸鏈復合體產生能量物質ATP。線粒體活性的評估旨在推斷酶復合物之間以及參與氧化磷酸化的氧化還原過程中電子傳遞的效率[2]，線粒體復合物活性下降可作為線粒體功能缺陷疾病的輔助判斷依據之一。  

活性氧的檢測

正常情況下，細胞存在抗氧化系統(tǒng)，其中包括還原性物質與抗氧化酶，這些抗氧化系統(tǒng)可減少細胞內活性氧(ROS)含量?；钚匝?ROS)是一類化學性質活潑，具有較高氧化活性的分子或離子的總稱。主要包括超氧陰離子、過氧化氫(H2O2)、羥自由基(HO·)，機體機能出現(xiàn)障礙后，細胞內的抗氧化體系與ROS的相互作用出現(xiàn)失衡，氧自由基增加，從而進一步損害線粒體中的遺傳物質、蛋白質、脂質膜等，導致ATP合成減少、膜電位改變等功能變化[4]。因此，我們可以通過檢測活性氧的多少來測定線粒體的功能是否正常。

線粒體膜電位檢測

由于線粒體內膜具有其他內膜不具備的離子通過性，代謝產生的H+使線粒體內膜兩側通常出現(xiàn)負電位差(-180 mV~-200 mV)，這就是線粒體膜電位(mitochondrialmembrane potential, MMP, Δψm)。MMP的變化甚至微量變化，都會極大地影響線粒體的功能[5]。MMP的異常變化會進一步導致線粒體疾病。監(jiān)測MMP是評估線粒體功能狀態(tài)的常用方法。

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