細(xì)胞培養(yǎng)過程中如何避免微生物污染？

細(xì)胞培養(yǎng)過程中常見的可造成污染的微生物包括細(xì)菌、真菌、支原體、酵母等，不論是哪種污染，均會(huì)造成細(xì)胞生長(zhǎng)變慢、培養(yǎng)基渾濁、細(xì)胞變形等不利于細(xì)胞生長(zhǎng)的現(xiàn)象，更有甚者可能會(huì)出現(xiàn)污染同細(xì)胞箱內(nèi)別的細(xì)胞的現(xiàn)象，因此，細(xì)胞培養(yǎng)過程中應(yīng)樹立嚴(yán)格的無菌意識(shí)，盡量避免造成細(xì)胞污染。

準(zhǔn)備處理細(xì)胞前，有如下幾點(diǎn)注意事項(xiàng)：

1. 細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)在細(xì)胞房?jī)?nèi)進(jìn)行，同時(shí)細(xì)胞房應(yīng)保證環(huán)境狀況良好，空氣干燥。

   
   

2. 進(jìn)入細(xì)胞房前應(yīng)在緩沖間穿戴細(xì)胞房專用隔離衣、專用拖鞋，戴好一次性口罩及手套。

3.細(xì)胞房應(yīng)配置75%酒精噴壺，打開細(xì)胞培養(yǎng)箱前應(yīng)使用75%酒精全面消毒雙手，同時(shí)對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)箱外側(cè)進(jìn)行消毒。

4.細(xì)胞操作過程中所使用的耗材如槍頭、Ep管、凍存管、離心管等均要求無菌，使用到的儀器如離心機(jī)、移液器、水浴鍋等均為細(xì)胞房專用儀器。

5.處理細(xì)胞等一系列操作均應(yīng)在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行。

6.細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)應(yīng)加入硫酸銅溶液，防止細(xì)胞污染，同時(shí)，每天處理細(xì)胞的同時(shí)注意觀察CO2罐的容量，若不足及時(shí)更換。

開始處理細(xì)胞到結(jié)束的過程是細(xì)胞最容易出現(xiàn)污染的環(huán)節(jié)，因此需格外注意操作，注意事項(xiàng)如下：

1.開始操作前，生物安全柜內(nèi)放入需要的物品，開啟紫外燈消毒30min。

2.消毒結(jié)束后，用75%酒精浸泡的棉球或紗布擦拭臺(tái)面，后面所有放入生物安全柜內(nèi)的物品均需酒精噴灑消毒。

3.對(duì)于一般的細(xì)胞來說，正常培養(yǎng)的過程中均應(yīng)在培養(yǎng)基中按比例加入青霉素鏈霉素雙抗，防止細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)菌污染。

4.在處理細(xì)胞的過程中，小心操作，移液器槍頭不能碰到生物安全柜內(nèi)任何物品，若有碰到應(yīng)及時(shí)更換，同時(shí)，吸取不同液體時(shí)注意及時(shí)更換槍頭，防止出現(xiàn)交叉污染。

5.所有培養(yǎng)基配置完成后建議分裝使用，每次實(shí)驗(yàn)結(jié)束后剩余培養(yǎng)基、胰酶等均用封口膜進(jìn)行封口。

6.處理細(xì)胞完成后，使用75%酒精浸泡的紗布仔細(xì)擦拭臺(tái)面，最后開啟紫外燈消毒。

7.在所有人結(jié)束細(xì)胞實(shí)驗(yàn)后，細(xì)胞房?jī)?nèi)應(yīng)嚴(yán)格消毒，將84消毒液或新潔爾滅稀釋后擦拭桌面，再用專用拖把拖地，最后開啟紫外燈消毒。

細(xì)胞操作整個(gè)過程較為簡(jiǎn)單，但操作需要注意很多細(xì)節(jié)，細(xì)胞污染可能避無可避，一旦出現(xiàn)了細(xì)胞污染，建議盡早扔掉細(xì)胞并對(duì)培養(yǎng)箱進(jìn)行消毒。

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