從原理到實(shí)操，蝦青素抗肝纖維化實(shí)驗(yàn)流程?。?）

3 C57小鼠肝纖維化模型每周監(jiān)測(cè)
在肝纖維化模型建立過(guò)程中，每周系統(tǒng)監(jiān)測(cè)小鼠的體重、活動(dòng)度及毛發(fā)狀態(tài)是評(píng)估模型進(jìn)展、藥物干預(yù)效果及動(dòng)物福利的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。以下為具體操作流程及注意事項(xiàng)：

3.1 監(jiān)測(cè)頻率與時(shí)間點(diǎn)

• 監(jiān)測(cè)頻率：每周固定時(shí)間點(diǎn)（如每周一上午9:00-11:00）監(jiān)測(cè)1次。

• 監(jiān)測(cè)周期：

模型誘導(dǎo)期：DMN注射開(kāi)始至建模完成（通常4-6周）。  

干預(yù)治療期：給藥開(kāi)始至實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)（通常4-8周）。  

3.2 具體監(jiān)測(cè)方法與記錄標(biāo)準(zhǔn)

3.2.1 體重稱(chēng)量

操作步驟：

1. 設(shè)備準(zhǔn)備：使用精度0.1 g的電子天平，校準(zhǔn)歸零。

2. 小鼠固定：

• 輕柔抓取小鼠尾部，將其置于專(zhuān)用稱(chēng)量盒（底部鋪濾紙防滑）。  

• 避免抓握腹部（可能加劇肝區(qū)疼痛）。  

3. 稱(chēng)量記錄：待數(shù)值穩(wěn)定后記錄體重（單位：g），精確至小數(shù)點(diǎn)后1位。

4. 清潔消毒：每次稱(chēng)量后用75%酒精擦拭稱(chēng)量盒，防止交叉污染。  

5. 計(jì)算體重變化率} (%) = - }/} * 100%

6. 異常判定：

• 顯著下降：連續(xù)2周體重降幅≥10%，或單周降幅≥15%。

• 顯著上升：排除腹水后，體重增幅≥20%（可能提示代謝異常）。  

3.2.2 活動(dòng)度評(píng)估

觀察指標(biāo)：

• 自主活動(dòng)：在開(kāi)放場(chǎng)（如30 cm×30 cm透明箱）中觀察5分鐘，記錄以下行為：

• 水平運(yùn)動(dòng)：穿越區(qū)域次數(shù)（四肢全部進(jìn)入新區(qū)域計(jì)1次）。  

• 垂直探索：前肢離地站立次數(shù)（持續(xù)≥1秒）。  

• 靜止時(shí)間：無(wú)主動(dòng)移動(dòng)的累計(jì)時(shí)間（秒）。  

• 應(yīng)激反應(yīng)：抓取時(shí)掙扎強(qiáng)度（輕度/中度/劇烈）。

評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)（參考改良的Murphy評(píng)分）：

記錄與處理：

評(píng)分≥2分且持續(xù)48小時(shí)，需考慮提前優(yōu)逝。

3.2.3 毛發(fā)狀態(tài)觀察

觀察指標(biāo)：

• 毛發(fā)蓬松度：正常（緊貼皮膚） vs. 蓬松（豎立如“炸毛"）。

• 光澤度：光滑有光澤 vs. 暗淡無(wú)光。

• 脫毛區(qū)域：記錄脫毛部位（頭頸部、背部、腹部）及面積（直徑cm）。

• 皮膚損傷：紅斑、結(jié)痂、潰瘍等。

分級(jí)記錄：

• 1級(jí)異常：加強(qiáng)墊料清潔，補(bǔ)充維生素（如飲水中添加復(fù)合維生素B）。

• 2級(jí)異常：結(jié)合體重和活動(dòng)度評(píng)估，必要時(shí)終止實(shí)驗(yàn)。

3.3 注意事項(xiàng)

1. 減少應(yīng)激：

• 固定監(jiān)測(cè)人員，操作輕柔，避免噪音干擾。  

• 稱(chēng)重與行為學(xué)觀察在不同時(shí)間段進(jìn)行（如上午稱(chēng)重，下午行為測(cè)試）。  

2. 環(huán)境控制：

維持SPF級(jí)環(huán)境（溫度22-24℃，濕度50-60%），避免環(huán)境波動(dòng)影響數(shù)據(jù)。  

3. 倫理閾值：

體重下降≥20%、活動(dòng)度評(píng)分≥2持續(xù)48小時(shí)或嚴(yán)重皮膚損傷，需立即啟動(dòng)優(yōu)逝程序。  

3.4 常見(jiàn)問(wèn)題與解決方案

通過(guò)系統(tǒng)監(jiān)測(cè)體重、活動(dòng)度及毛發(fā)狀態(tài)，可全面評(píng)估肝纖維化模型小鼠的生理狀態(tài)，為實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性及倫理合規(guī)性提供保障。

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