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原代細胞轉(zhuǎn)染試劑的轉(zhuǎn)染效率受何因素影響？
發(fā)布時間： 2022-01-05 點擊次數(shù)： 934次細胞轉(zhuǎn)染是指將外源分子如DNA、RNA等導入真核細胞的技術。隨著分子生物學和細胞生物學研究的不斷發(fā)展，轉(zhuǎn)染技術已成為研究和控制真核細胞基因功能的常規(guī)工具。在研究基因功能、調(diào)控基因表達、突變分析和蛋白質(zhì)生產(chǎn)等生物學試驗中，其應用越來越廣泛。原代細胞轉(zhuǎn)染試劑可轉(zhuǎn)染極度難轉(zhuǎn)染的免疫細胞、懸浮細胞，如T細胞、NK細胞、人淋巴細胞、THP-1等；可高效率轉(zhuǎn)染siRNA到任何哺乳動物細胞。用于將DNA和siRNA轉(zhuǎn)染到真核細胞系和各種原代細胞中；轉(zhuǎn)染細胞后可10小時內(nèi)快速代謝的第三代新轉(zhuǎn)染試劑。原代細胞轉(zhuǎn)染試劑的轉(zhuǎn)染效率受以下因素影響：1.細胞培養(yǎng)物健康的細胞培養(yǎng)物是成功轉(zhuǎn)染的基礎。不同細胞有不同的培養(yǎng)基，血清和添加物。低的細胞代數(shù)能確保基因型不變。高的轉(zhuǎn)染效率需要一定的細胞密度，一般的轉(zhuǎn)染試劑都會有專門的說明。推薦在轉(zhuǎn)染前24小時分細胞，這將提供正常細胞代謝，增加對外源DNA攝入的可能。一定要避免細菌，支原體或真菌的污染。2.血清大多數(shù)培養(yǎng)基在使用前需要加血清。胎牛血清經(jīng)常用到，便宜一點的有馬或牛血清。通常的，血清是一種包含生長因子及其它輔助因子的不確切成分的添加物，對不同細胞的生長作用有很大的差別。血清質(zhì)量的變化直接影響轉(zhuǎn)染效率。因此在轉(zhuǎn)染前建議先測(轉(zhuǎn)右)試出對細胞生長良好的血清批號，轉(zhuǎn)染時用同一批號的血清，并同時做負對照以測試細胞生長是否正常。有些轉(zhuǎn)染技術如脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染在有血清存在情況下效率很低，因此在轉(zhuǎn)染前要除血清。但有些對此敏感的細胞如原代細胞會受到損傷，甚至死亡導致轉(zhuǎn)染效率極低。3.載體構建轉(zhuǎn)染載體的構建也影響轉(zhuǎn)染結(jié)果。病毒載體對特定宿主細胞感染效率較高，但不同病毒載體有其特定的宿主，有的還要求特定的細胞周期，如逆轉(zhuǎn)錄病毒需侵染分裂期的宿主細胞，此外還需考慮一些安全問題。除載體構建外，載體的形態(tài)及大小對轉(zhuǎn)染效率也有不同的影響，如前面提到的超螺旋及線性DNA對瞬時和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的影響。如果基因產(chǎn)物對細胞有毒性作用，轉(zhuǎn)染也很難進行，因此選擇組成或可調(diào)控，強度合適的啟動子也很重要，同時做空載體及其它基因的相同載體構建的轉(zhuǎn)染正對照可排除毒性影響的干擾。4.DNA質(zhì)量DNA質(zhì)量對轉(zhuǎn)染效率影響非常大。一般的轉(zhuǎn)染技術基于電荷吸引原理，如果DNA不純，如帶少量的鹽離子、蛋白、代謝物污染都會顯著影響轉(zhuǎn)染復合物的有效形成及轉(zhuǎn)染的進行。5.轉(zhuǎn)染技術轉(zhuǎn)染技術的選擇對轉(zhuǎn)染結(jié)果影響也很大，許多轉(zhuǎn)染方法需要優(yōu)化DNA與轉(zhuǎn)染試劑比例，細胞數(shù)量，培養(yǎng)及檢測時間等。
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